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磁珠法全血提取过程应注意哪些问题

发布时间：

2023-10-17 10:52

实验室提取全血核酸，不同人操作，会有不同的结果，得率或高或低，洗脱或浑浊或发黄等等，会遇到各种各样的问题，下面对其中的常见问题进行了总结，仅供参考。

1、样本处理

如是-20°C冷冻保存的样本，有实验安排时提前拿出血样，解冻至室温，过冷或结块会影响裂解效果。

2、裂解结合

在裂解过程中，要按照说明书上进行操作，不同的上样量对应不同的试剂体系，上样量过多过少都会影响裂解的效果。以雷火竞技开发的全血基因组DNA提取试剂（磁珠法）为例，上样量为200ul，配合的裂解液用量为400ul，这样的搭配为最佳。无论是手工操作还是上机，不可避免有人为因素，加样过程中就要统一动作、快速并准确加样，以此减少误差。由于有些客户的实验，需要高产量，他们就会惯性的认为，等比例加大试剂就可以。其实是不是这样的，在实际操作中，不能简单的放大裂解体系，需要根据裂解液对样品裂解效率进行优化，将上样体积浓缩后，才可进行磁珠法操作流程的优化。

3、洗涤

样本经过裂解之后，在洗涤过程中，磁珠结团是经常遇到的现象，尤其手工操作时，这是由磁珠本身特性和磁珠所处试剂环境两方面造成的，有些磁珠不仅在全血DNA提取过程中会结团，其他的样本也同样会结团，其实结团现象可以用来提前预判实验结果，结团往往是吸附了大量核酸，如果哪次实验没有结团，本次的实验结果或许会不太好，不过也不能一概而论，杂质太多也是引起磁珠结团的原因。通过修改试剂配方，优化试剂用量，可以改善磁珠的结团现象，这就需要对各种参数进行调整。

4、洗脱

得率是影响下游实验的最直接因素，根据我们的经验，200ul的全血，得率一般在10ug以上，但是有时实验的结果只有2ug左右，甚至更低，这样的结果可能是两方面导致的，第一是裂解，第二是洗脱。若是裂解过程的问题，可能是裂解不充分，在洗涤的时候上清液颜色会发黄、发红，这种情况下，可以提高裂解温度，或者增加裂解液使用量。洗脱环节的问题，经常表现为结团的磁珠未被打散，或有挂壁现象，磁珠有滞留，从而减少了核酸的含量，可考虑加大震荡力度，或用枪头吹吸解决。

【实验案例】

案例1：

同一批次试剂提取不同健康人新鲜血样的实验结果：

样本序号	样本	A260/A280	A260/A230	Conc.(ng/µL)
1	1号血样	1.80	1.89	75.7
2	2号血样	1.89	1.89	73.9
3	3号血样	1.83	1.93	68.2
4	4号血样	1.82	1.90	67.9
5	5号血样	1.84	1.99	59.1

电泳图如下：

结果分析：试剂的提取效果很好（提取产物纯度好、浓度高、电泳条带完整）

案例2：

不同批次试剂提取同一猪血样本的实验结果：

试剂批号	A260/A280	A260/A230	Conc.(ng/µL)
批次1	1.87	1.90	157.5
批次1	1.87	1.96	137.9
平均值	1.87	1.93	147.7
批次2	1.88	1.92	132.6
批次2	1.88	1.99	140.4
平均值	1.88	1.96	136.5
批次3	1.89	1.95	141.2
批次3	1.89	1.91	141.7
平均值	1.89	1.93	141.4

结果分析：由上图可以看出，提取试剂批次间差异小。

雷火电子竞技平台成立于2016年，位于上海市青浦区张江云立方园区。公司长期致力于生物领域内相关产品的研发、生产和销售，产品主要包括磁性纳米材料和磁珠法核酸提取纯化试剂。公司一直坚持以“质量、诚信、团结、奋进”为宗旨，严格规范质量管理体系，持续创新、精益求精，为客户提供优质的产品和服务,被认定为国家级高新技术企业和上海市专精特新企业。