植物基因组DNA提取 (磁珠法)
发布时间:
2024-03-22 08:47
植物基因组DNA提取
(磁珠法)
小麦是我国主要粮食作物之一,所以关于小麦分子生物学方面的研究也非常重要,技术也日益深入,不论是基因克隆与转化,遗传图谱构建,特定基因型检测,分子标记辅助育种及DNA指纹数据库构建等,在小麦育种中应用广泛,高质量的DNA提取的在分子水平上对植物进行系统分析与研究的基础,而植物基因组DNA提取的方法有许多,但是多数需要以植物新鲜组织为样本,这样限制条件较多且步骤多,耗时长。而植物种子可以在常温下保存,这样作为提取基因DNA时可以不受季节和形态等问题限制。下面我们以多种植物种子为实验材料采用
上海雷火竞技有限公司的植物基因组DNA提取试剂盒(磁珠法)提取植物基因组DNA
这种试剂盒内包括裂解结合液、磁珠、异丙醇、PK、DTT、洗涤液,还有洗脱液等试剂。
- 样本处理
花生 玉米 小麦
- 裂解结合
在使用时,需要将种子样本放置研钵中破碎,然后加入裂解结合液,使DNA/RNA从细胞中释放出来,然后离心取上清。
- 洗涤
使用试剂盒中的洗涤液进行洗涤,这一步可提高基因组的纯度。不同样本可进行轻微调整。
- 洗脱
洗脱的步骤是将吸附在磁珠表面的基因组DNA洗脱下来,并溶于洗脱液中,然后进行其他下游实验。
现将结果报道如下:
案例1:同一批次试剂提取不同植物种子的实验结果:
样本 |
序号 |
A260/A280 |
A260/A230 |
Conc.(ng/μL) |
花生胚芽5 mg |
1 |
1.903 |
1.063 |
391.85 |
2 |
1.935 |
1.162 |
388.85 |
|
3 |
1.950 |
1.195 |
395.45 |
|
平均值 |
1.929 |
1.140 |
392.05 |
|
玉米20 mg |
4 |
2.192 |
1.897 |
518.35 |
5 |
2.180 |
1.896 |
542.1 |
|
6 |
2.188 |
1.906 |
538.9 |
|
平均值 |
2.187 |
1.9 |
533.117 |
|
小麦10 mg |
7 |
2.03 |
1.32 |
77.65 |
8 |
2.006 |
1.316 |
80.85 |
|
9 |
2.003 |
1.268 |
81.4 |
|
平均值 |
2.013 |
1.301 |
79.967 |
图1 核酸提取电泳图
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