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化学发光酶联免疫技术（双抗夹心法）

发布时间：

2023-11-15 17:49

化学发光酶联免疫技术（双抗夹心法）

化学发光免疫分析技术（CLIA）：

化学发光免疫分析技术是一种高度灵敏的分析工具，用于确定样品中蛋白质和其他分子的浓度。该技术基于抗体-抗原结合的原理，在化学发光底物存在的情况下产生光信号。发射的光的强度与样品中存在的分析物的浓度成正比。

磁珠法化学发光酶联免疫分析技术（ME-CLIEA）：

磁珠法化学发光双抗体夹心酶联免疫分析是集磁珠分离技术、灵敏的化学发光分析和特异性抗原抗体免疫分析于一体的检测技术。利用酶标抗体、检测样品中的靶抗原、磁珠抗体形成夹心结构，结合状态（复合物：酶标抗体+目标抗原+磁性颗粒）通过磁场分离。将游离状态的非目标物质和酶标抗体分离出来，加入发光底物进行发光反应，通过检测发光强度进行定量或定性测定。抗体与目标物质结合，然后利用发光反应来测量样品中存在的物质的量。该方法可用于多种应用，例如医疗诊断和环境测试。此技术属于酶免疫测定的一种。区别于酶联免疫定量检测试剂盒，接着后一步酶反应所用的底物为发光剂，通过发光反应发出的光在特定的仪器上进行测定。CLIEA两种常用的标记酶，辣根过氧化物酶（HRP）和碱性磷酸酶（AP）均有其发光底物，由此建立的CLEIA均在临床检验中应用。

图1 磁珠法酶免（化学发光）测抗原

ME-CLIEA双抗夹心法检测抗原

双抗体夹心法（两步法）是检测抗原常用的方法。

图2 采用双抗夹心法（两步法）进行化学发光检测基本原理

操作步骤：

①将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。

②加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。

③加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量成正相关。

④加发光底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。

ME-CLIEA应用

（1）甲状腺激素：

T3、T4、hTSH、FT4、FT3、抗TPO、甲状腺球蛋白、抗甲状腺球蛋白抗体等。

（2）生殖激素：

B-HCG、催乳素、促卵泡激素、促黄体激素、孕酮、雌二醇、非结合雌三醇、甲胎蛋白、睾丸酮、硫酸脱氢异雄酮。

（3）肾上腺/垂体激素：

皮质醇、尿皮质醇、人生长激素、甲状旁腺素、促肾上腺皮质激素。

（4）贫血因子：

维生素B12、叶酸、红细胞叶酸、铁蛋白等。

（5）肿瘤标记物：
AFP、CEA、PSA、游离PSA、CAI9-9、CAI25、CAI5-3等。

（6）感染性疾病：

衣原体抗原、尿衣原体抗原、衣原体抗原确认、弓形体lgG抗体、弓形体lgM抗体、风疹病毒lgG抗体、风疹病毒lgM抗体、巨细胞病毒lgG抗体、巨细胞病毒lgM抗体等。

（7）糖尿病：

胰岛素、C肽等。

（8）心血管系统：

肌酸激酶MB同工酶、地高辛、肌红蛋白、肌钙蛋白-1等。

（9）病毒标记物：

HIVI/2Ab、HbsAg、HBsAg、HbsAb、HCVAb、HAVIgM、HAVAb、HbcAb、HBclgM、HBeAg、HBeAb等。

（10）骨代谢：

骨胶原酶、脱氧吡啶啉等。

（11）过敏性疾病：

总IgE、特异性lgE等。

（12）治疗药物监测：

茶碱、地高辛、环孢素、巴比妥等。

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